HLA基因相合造血干细胞的构建与扩增研究
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成果类型: 省外成果
所属行业: 医学研究和试验发展
研发时间:
-
申请(专利)号
国内:
国际:
成果归属: 滨州医学院、王跃嗣,姜昱竹,李娜,徐慧,姚庆收
技术成熟度: 研发阶段
技术水平:
预期交易价格:
预期投资额度:
成果简介
本项目以人体早期胚胎卵黄囊、胚胎干细胞和脐血造血干细胞为研究对象,利用免疫组织化学、细胞培养、流式细胞术及基因表达检测等实验技术对胚胎中造血微环境、细胞因子、脐血中造血干细胞、及胚胎干细胞进行了深入系统的研究。应用免疫荧光和免疫组织化学方法研究了胚胎造血过程中成血管血液干细胞和造血干细胞形成的不同分化阶段,发现在造血中胚层时期就表达FGF1,BMP4,VEGF和SCF等细胞因子,并随着时间推移,表达逐渐增多。造血分化的形成经历造血中胚层-成血管血液干细胞-造血干细胞三个阶段,相应的造血标志物分别为Flk-1(KDR)、CD133和CD34,呈现阶段性表达。后用RT-PCR分析造血分化过程中造血相关转录因子的变化;采用胚胎干细胞造血诱导分化模型验证FGF1、BMP4和VEGF等在造血微环境中的作用;确定FGF1、BMP4和VEGF是定向分化的关键因子。在此基础上,利用脐血造血干细胞为供体,以患者成纤维细胞为基础进行融合研究,构建与患者HLA配型一致的融合造血干细胞,利用上述造血微环境细胞因子组合,加上间充质干细胞作基质,进行融合干细胞的大规模扩增研究,显着提高扩增水平。 2、主要技术性能指标(1)利用免疫荧光、免疫组化和RT-PCR等技术,筛选和鉴定了影响胚胎造血微环境的关键因子(FGF1、BMP4和转录因子等),揭示了FGF1和BMP4是早期参与启动造血形成和分化所必需。(2)建立了利用胚胎干细胞造血模型研究成血管血液干细胞造血分化的平台。(3)建立了利用细胞融合构建与患者自体HLA配型一致的造血干细胞与扩增的新技术,发现了影响细胞融合的关键作用因素。本研究筛选和鉴定了FGF1、BMP4与转录因子是诱导造血干细胞形成和分化的重要因子,建立了利用细胞融合构建与患者自体HLA配型一致的造血干细胞与扩增的新技术,大大提高了造血干细胞定向分化与扩增效率,为以后造血干细胞治疗血液疾病的临床应用提供了理想的模型和技术基础,具有重要的学术意义和临床应用价值。研究共发表了相关学术论文12篇,其中SCI刊物2篇,合计影响因子达11.9。相关论文在国际会议上海国际干细胞研讨会上作展示,在第四届中国细胞生物学全国学术大会和第三届中国医学细胞生物学学术大会等展示,申报国家发明专利一项。培养了一支从事干细胞与组织工程研究的优秀创新团队。造血微环境相关因子研究已在滨州医学院生物技术专业和研究生授课过程中作为最新研究成果推广应用,包括构建自体造血干细胞研究及相关模型等同时在毓璜顶医院和滨州医学院附属医院等相关科室进行推广。干细胞与组织工程研究所也已成为滨州和烟台多家研究单位干细胞来源的可靠保障,为干细胞的研究和应用提供了平台。
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